Cela dépend du type de tortue.

Chez les tortues terrestres, il faut regarder notamment le plastron, c'est à dire le dessous de la carapace. Chez les mâles, il est concave (légèrement bombé vers l'intérieur) alors que chez les femelles, il est plat. De plus, le mâle a une queue plus longue que la femelle et une écaille supracaudale (le bas de la carapace) courbée vers le plastron.

Ces différences sont plus difficiles à percevoir chez les tortues marines.

Chez les tortues aquatiques, le mâle a souvent des griffes plus développées, afin de lui permettre d'accrocher la femelle lors de l'accouplement.

Mais pour la plupart des tortues, il y a une différence de taille entre mâles et femelles. Pour les petites tortues, les femelles sont souvent plus grandes. Pour les espèces de grande taille, c'est l'inverse : les mâles sont plus grands que les femelles.

Enfin, certaines espèces très particulières ont des différences marquées entre mâles et femelles. Par exemple, chez la tortue Cistude, une petite tortue d'eau douce, les femelles ont les yeux jaunes tandis que les mâles ont les yeux rouges.